96 wohle Ausrüstung der Platten-Mauselisa/Maus Ausrüstung Resistin-Sandwich-ELISA besonders angefertigt

96 wohle Platten-Maus- Retn ELISA Ausrüstung Ausrüstungs-Maus-Resistin-Sandwich-ELISA besonders angefertigt
 

Cat.No E0263Mo

Standardkurven-Strecke: 0.3ng/ml - 90ng/ml

Empfindlichkeit: 0.13ng/ml

Größe: 96 Brunnen

*This Produkt ist für nur Forschungsgebrauch, nicht für Gebrauch in den Diagnosenverfahren. Es ist sich empfiehlt in hohem Grade, diese Anweisung völlig vor Gebrauch zu lesen.

Beabsichtigter Gebrauch

Diese Sandwichausrüstung ist für die genaue quantitative Entdeckung der Maus Nesfatin1 (alias Retn) im Serum, Plasma, Zellkulturobenschwimmung, Zellen-lysates, Gewebehomogenate.

Proben-Prinzip

Diese Ausrüstung ist eine Enzym-verbundene Immunosorbent-Probe (ELISA). Die Platte ist mit Maus-Retn-Antikörper vorgalvanisiert worden. Retn stellen sich in der Probe wird hinzugefügt und bindet an die Antikörper dar, die auf den Brunnen beschichtet werden. Und dann biotinylated Maus-Retn-Antikörper wird addiert und bindet an Retn in der Probe. Dann wird Streptavidin-HRP addiert und bindet an den Antikörper Biotinylated Retn. Nach Ausbrütung wird befreites Streptavidin-HRP weg während eines waschenden Schrittes gewaschen. Substratlösung wird dann addiert und Farbe entwickelt sich im Verhältnis zu der Menge der Maus Retn. Die Reaktion wird durch Zusatz von säurehaltigem stoppen Lösung beendet und Absorption wird bei 450 Nanometer gemessen.

Vorkehrungen

• Vor Gebrauch sollten die Ausrüstung und die Probe zur Raumtemperatur natürlich gewärmt werden 30 Minuten.
• Diese Anweisung muss in das Experiment ausschließlich befolgt werden.
• Sobald die gewünschte Anzahl von Streifen entfernt worden ist, versiegeln Sie sofort die Tasche wieder, um das Bleibung vor Verschlechterung zu schützen. Bedecken Sie alle Reagenzien, wenn nicht verwendet.
• Make sure Auftrag und Rate des Zusatzes von gut-zu-gut pipettierend, wenn Reagenzien pipettiert werden.
• Pipette kippt um und Platteneichmeister sollte sauber und Wegwerf in der Hand sein, Kreuz-Kontamination zu vermeiden.
• Vermeiden Sie, die Reagenzien von den verschiedenen Reihen zusammen zu verwenden.
• Substratlösung B ist für Licht, herausstellen nicht Substratlösung B, um für eine lange Zeit zu beleuchten empfindlich.
• Stoppen Sie Lösung enthält Säure. Tragen Sie bitte Augen-, Hand- und Hautschutz, wenn Sie dieses Material verwenden. Vermeiden Sie Kontakt der Haut oder der Schleimhäute mit Ausrüstungsreagens.
• Die Ausrüstung sollte nicht über dem Verfallsdatum hinaus benutzt werden.

Exemplar-Sammlung

Serum lassen Serum für 10-20 Minuten bei Zimmertemperatur gerinnen. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für 20 Minuten.

Plasma sammeln Plasma unter Verwendung des EDTA oder des Heparins als Antigerinnungsmittel. Zentrifugieren Sie Proben für 15 Minuten bei 2000-3000 U/min bei 2 - 8°C innerhalb 30 Minuten der Sammlung.

Urin sammeln durch steriles Rohr. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten. Wenn Sie pleuroperitoneal Flüssigkeit und Zerebrospinalflüssigkeit sammeln, halten Sie bitte die oben erwähnten Verfahren ein.

Zellkultur Supernatant sammeln durch sterile Rohre, bei der Untersuchung Komponenten absondern Sie. Zentrifugieren Sie bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten. Sammeln Sie die supernatants sorgfältig. Wenn Sie die Komponenten innerhalb der Zelle überprüfen, verwenden Sie PBS (pH 7.2-7.4) um Zellsuspendierung zur Zellkonzentration von ungefähr 1 million/ml zu verdünnen. Schädigen Sie Zellen durch wiederholte Frieren-Tauenzyklen, um die inneren Komponenten heraus zu lassen. Zentrifugieren Sie bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten.

Gewebe andere Körperflüssigkeiten spülen Gewebe in PBS (pH 7,4) aus um überschüssiges Blut gänzlich zu entfernen und vor Homogenisation zu wiegen. Zerkleinern Sie Gewebe und homogenisieren Sie sie in PBS (pH7.4) mit einem Glashomogenisierer auf Eis. Tauen Sie an 2-8°C auf oder frieren Sie an -20°C. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten ein.

Reagens-Vorbereitung

Alle Reagenzien sollten zur Raumtemperatur vor Gebrauch geholt werden.

Standard stellen das 120μl des Standards (96ng/ml) mit 120μl des Standardverdünnungsmittels wieder her, um eine Lösung der Standardaktie zu erzeugen 48ng/ml. Lassen Sie den Standard für 15 Minuten mit leichter Bewegung vor der Herstellung von Verdünnungen sitzen. Bereiten Sie doppelte Standardpunkte vor, indem Sie serienmäßig das 1:2 der Standardaktielösung (48ng/ml) mit Standardverdünnungsmittel verdünnen, um Lösungen 24ng/ml, 12ng/ml, 6ng/ml und 3ng/ml zu produzieren. Standardverdünnungsmittel dient als der nullstandard (0 ng/ml). Jede restliche Lösung sollte an -20℃ eingefroren werden und innerhalb eines Monats benutzt werden. Verdünnung vorgeschlagenen von den Standardlösungen sind, wie folgt:

Wäsche-Puffer verdünntes 20ml vom Wäsche-Puffer-Konzentrat 30x in entionisiert oder destilliertes Wasser, um 500 ml des Puffers der Wäsche-zu erbringen 1x. Wenn Kristalle sich im Konzentrat gebildet haben, Mischung leicht, bis die Kristalle vollständig sich aufgelöst haben.

Probierverfahren

1. Bereiten Sie alle Reagenzien vor, Standardlösungen und Proben, wie angewiesen. Holen Sie alle Reagenzien zur Raumtemperatur vor Gebrauch. Die Probe wird bei Zimmertemperatur durchgeführt.

2. Bestimmen Sie die Anzahl von den Streifen, die für die Probe erfordert werden. Fügen Sie die Streifen in die Rahmen für Gebrauch ein. Die unbenutzten Streifen sollten an 2-8°C. gespeichert werden.

3. Fügen Sie Standard 50μl Standard gut hinzu. Anmerkung: Fügen Sie Antikörper nicht Standard gut hinzu, weil die Standardlösung biotinylated Antikörper enthält.

4. Fügen Sie Probe 40μl Beispielbrunnen hinzu und dann fügen Sie anti--Retn Antikörper 10μl Beispielbrunnen hinzu, dann fügen Sie streptavidin-HRP 50μl Beispielbrunnen und Standardbrunnen hinzu (nicht Leerzeichenaufbereitungssteuerungsbrunnen). Mischen Sie gut. Bedecken Sie die Platte mit einem Eichmeister. Brüten Sie 60 Minuten an 37°C. aus.

5. Entfernen Sie den Eichmeister und waschen Sie die Platte 5mal mit Wäschepuffer. Tränken Sie Brunnen mit mindestens 0,35 ml-Wäschepuffer für 30 Sekunden bis 1 Minute für jedes Washington. Für automatisierte Reinigung saugen Sie alle Brunnen an und waschen Sie 5mal mit dem Wäschepuffer und überfüllen hervorquillt mit Wäschepuffer. Beflecken Sie die Platte auf Papierhandtücher oder anderes saugfähiges Material.

6. Fügen Sie Lösung A des Substrates 50μl jedem Brunnen hinzu und fügen Sie Lösung dann B des Substrates 50μl jedem gut hinzu. Brüten Sie die Platte aus, die mit einem neuen Eichmeister für 10 Minuten an 37°C in der Dunkelheit bedeckt wird.

7. Addieren Sie 50μl stoppen Lösung zu jedem gut, die blaue Farbe ändert in Gelb sofort.

8. Bestimmen Sie die optische Dichte (Od-Wert) von jedem Brunnen sofort unter Verwendung eines microplate Lesersatzes bis 450 Nanometer innerhalb 10 Menuetts, nachdem Sie die Endlösung addiert haben.

Referances

„Resistin und RELM-Alphagenexpression im weißen Fettgewebe von Milchabsonderungsmäusen.“
Bing C., Gómez-Ambrosi J., Zabalegui N., Williams G., Trayhurn P.
Biochemie. Biophys. Res. Commun. 296:458- 462(2002)