Kundengebundenes Ratten-Insulin mag Ausrüstung 96 des Groeth-Faktor-Bindeprotein-3 ELISA Ausrüstung Wells IGFBP3 Sandwich-ELISA

Kundengebundenes Ratten-Insulin mag Ausrüstung 96 des Groeth-Faktor-Bindeprotein-3 ELISA Sandwich Wells IGFBP3 Elisa-Ausrüstung

Cat.No E1613Ra

Standardkurven-Strecke: 2ng/ml - 600ng/ml

Empfindlichkeit: 0.93ng/ml

Größe: 96 Brunnen

Lagerung: Speichern Sie die Reagenzien an 2-8°C. für 6-monatige übermäßiglagerung sich beziehen das auf Verfallsdatum halten sie an -20°C. Avoid wiederholten Tauwetterzyklen. Wenn einzelne Reagenzien geöffnet sind, wird es empfohlen, dass die Ausrüstung innerhalb 1-monatigen benutzt wird.

*This Produkt ist für nur Forschungsgebrauch, nicht für Gebrauch in den Diagnosenverfahren. Es ist sich empfiehlt in hohem Grade, diese Anweisung völlig vor Gebrauch zu lesen.

Beabsichtigter Gebrauch

Diese Sandwichausrüstung ist für die genaue quantitative Entdeckung des Ratten-Insulins wie Groeth-Faktor-Bindeprotein 3 (alias IGFBP3) im Serum, Plasma, Zellkulturobenschwimmung, Zellen-lysates, Gewebehomogenate.

Proben-Prinzip

Diese Ausrüstung ist eine Enzym-verbundene Immunosorbent-Probe (ELISA). Die Platte ist mit Antikörper der Ratte IGFBP3 vorgalvanisiert worden. IGFBP3 stellen sich in der Probe wird hinzugefügt und bindet an die Antikörper dar, die auf den Brunnen beschichtet werden. Und dann biotinylated Antikörper der Ratten-IGFBP3 wird addiert und bindet an IGFBP3 in der Probe. Dann wird Streptavidin-HRP addiert und bindet an den Antikörper Biotinylated IGFBP3. Nach Ausbrütung wird befreites Streptavidin-HRP weg während eines waschenden Schrittes gewaschen. Substratlösung wird dann addiert und Farbe entwickelt sich im Verhältnis zu der Menge der Ratte IGFBP3. Die Reaktion wird durch Zusatz von säurehaltigem stoppen Lösung beendet und Absorption wird bei 450 Nanometer gemessen.

Reagens bereitgestellt

Vorkehrungen

• Vor Gebrauch sollten die Ausrüstung und die Probe zur Raumtemperatur natürlich gewärmt werden 30 Minuten.
• Diese Anweisung muss in das Experiment ausschließlich befolgt werden.
• Sobald die gewünschte Anzahl von Streifen entfernt worden ist, versiegeln Sie sofort die Tasche wieder, um das Bleibung vor Verschlechterung zu schützen. Bedecken Sie alle Reagenzien, wenn nicht verwendet.
• Make sure Auftrag und Rate des Zusatzes von gut-zu-gut pipettierend, wenn Reagenzien pipettiert werden.
• Pipette kippt um und Platteneichmeister sollte sauber und Wegwerf in der Hand sein, Kreuz-Kontamination zu vermeiden.
• Vermeiden Sie, die Reagenzien von den verschiedenen Reihen zusammen zu verwenden.
• Substratlösung B ist für Licht, herausstellen nicht Substratlösung B, um für eine lange Zeit zu beleuchten empfindlich.
• Stoppen Sie Lösung enthält Säure. Tragen Sie bitte Augen-, Hand- und Hautschutz, wenn Sie dieses Material verwenden. Vermeiden Sie Kontakt der Haut oder der Schleimhäute mit Ausrüstungsreagens.
• Die Ausrüstung sollte nicht über dem Verfallsdatum hinaus benutzt werden.

Reagens-Vorbereitung

Alle Reagenzien sollten zur Raumtemperatur vor Gebrauch geholt werden.

Standard stellen das 120μl des Standards (800ng/ml) mit 120μl des Standardverdünnungsmittels wieder her, um eine Lösung der Standardaktie zu erzeugen 400ng/ml. Lassen Sie den Standard für 15 Minuten mit leichter Bewegung vor der Herstellung von Verdünnungen sitzen. Bereiten Sie doppelte Standardpunkte vor, indem Sie serienmäßig das 1:2 der Standardaktielösung (400ng/ml) mit Standardverdünnungsmittel verdünnen, um Lösungen 200ng/ml, 100ng/ml, 50ng/ml und 25ng/ml zu produzieren. Standardverdünnungsmittel dient als der nullstandard (0 ng/ml). Jede restliche Lösung sollte an -20℃ eingefroren werden und innerhalb eines Monats benutzt werden. Verdünnung vorgeschlagenen von den Standardlösungen sind, wie folgt:

Wäsche-Puffer verdünntes 20ml vom Wäsche-Puffer-Konzentrat 30x in entionisiert oder destilliertes Wasser, um 500 ml des Puffers der Wäsche-zu erbringen 1x. Wenn Kristalle sich im Konzentrat gebildet haben, Mischung leicht, bis die Kristalle vollständig sich aufgelöst haben.

Probierverfahren

1. Bereiten Sie alle Reagenzien vor, Standardlösungen und Proben, wie angewiesen. Holen Sie alle Reagenzien zur Raumtemperatur vor Gebrauch. Die Probe wird bei Zimmertemperatur durchgeführt.

2. Bestimmen Sie die Anzahl von den Streifen, die für die Probe erfordert werden. Fügen Sie die Streifen in die Rahmen für Gebrauch ein. Die unbenutzten Streifen sollten an 2-8°C. gespeichert werden.

3. Fügen Sie Standard 50μl Standard gut hinzu. Anmerkung: Fügen Sie Antikörper nicht Standard gut hinzu, weil die Standardlösung biotinylated Antikörper enthält.

4. Fügen Sie Probe 40μl Beispielbrunnen hinzu und dann fügen Sie Antikörper 10μl anti-IGFBP3 Beispielbrunnen hinzu, dann fügen Sie streptavidin-HRP 50μl Beispielbrunnen und Standardbrunnen hinzu (nicht Leerzeichenaufbereitungssteuerungsbrunnen). Mischen Sie gut. Bedecken Sie die Platte mit einem Eichmeister. Brüten Sie 60 Minuten an 37°C. aus.

5. Entfernen Sie den Eichmeister und waschen Sie die Platte 5mal mit Wäschepuffer. Tränken Sie Brunnen mit mindestens 0,35 ml-Wäschepuffer für 30 Sekunden bis 1 Minute für jedes Washington. Für automatisierte Reinigung saugen Sie alle Brunnen an und waschen Sie 5mal mit dem Wäschepuffer und überfüllen hervorquillt mit Wäschepuffer. Beflecken Sie die Platte auf Papierhandtücher oder anderes saugfähiges Material.

6. Fügen Sie Lösung A des Substrates 50μl jedem Brunnen hinzu und fügen Sie Lösung dann B des Substrates 50μl jedem gut hinzu. Brüten Sie die Platte aus, die mit einem neuen Eichmeister für 10 Minuten an 37°C in der Dunkelheit bedeckt wird.

7. Addieren Sie 50μl stoppen Lösung zu jedem gut, die blaue Farbe ändert in Gelb sofort.

8. Bestimmen Sie die optische Dichte (Od-Wert) von jedem Brunnen sofort unter Verwendung eines microplate Lesersatzes bis 450 Nanometer innerhalb 10 Menuetts, nachdem Sie die Endlösung addiert haben.

Zusammenfassung

1. Bereiten Sie alle Reagenzien, Proben und Standards vor.

2. Fügen Sie Probe und ELISA-Reagens in jedes gut hinzu. Brüten Sie 1 Stunde lang an 37°C. aus.

3. Waschen Sie die Platte 5mal.

4. Fügen Sie Substratlösung A und B. Incubate für 10 Minuten an 37°C. hinzu.

5. Fügen Sie stoppen Lösung hinzu und Farbe entwickelt sich.

6. Lesen Sie den Od-Wert innerhalb 10 Minuten.

Berechnung des Ergebnisses

Konstruieren Sie eine Standardkurve, indem Sie das durchschnittliche Od für jedes grafisch darstellen, das auf der vertikalen (Y) Achse gegen die Konzentration auf der horizontalen (X) Achse Standard ist und zeichnen Sie eine beste Sitzkurve durch die Punkte auf dem Diagramm. Diese Berechnungen können mit computer-gestützter Kurveinstallations-Software gute Leistung gebracht werden und die beste Sitzlinie kann durch Regressionsanalyse bestimmt werden.

Referances

„KEINE Spiele eine Rolle in den Langspielplatte-bedingten Abnahmen, an, IGF-I und IGFBP-3 zu verteilen und ihre Genexpression an der Leber.“
Priego T., Ibanez-De Caceres I., Martin A.I., Villanua M.A., Lopez-Calderon A.
Morgens. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 286: E50- 6(2004)