Fertigte diese Sandwichausrüstung ist Proben-Ausrüstung hohe Präzisions-Laborforschungs-Ratte Glial feinfaserige säurehaltige Protein-ELISA besonders an

Fertigte diese Sandwichausrüstung ist Proben-Ausrüstung hohe Präzisions-Laborforschungs-Ratte Glial feinfaserige säurehaltige Protein-ELISA besonders an

Standardkurven-Strecke: 10pg/ml - 2000pg/ml

Empfindlichkeit: 5.43pg/ml

Größe: 96 Brunnen

Lagerung: Speichern Sie die Reagenzien an 2-8°C. für 6-monatige übermäßiglagerung sich beziehen das auf Verfallsdatum halten sie an -20°C. Avoid wiederholten Tauwetterzyklen. Wenn einzelne Reagenzien geöffnet sind, wird es empfohlen, dass die Ausrüstung innerhalb 1-monatigen benutzt wird.

*This Produkt ist für nur Forschungsgebrauch, nicht für Gebrauch in den Diagnosenverfahren. Es ist sich empfiehlt in hohem Grade, diese Anweisung völlig vor Gebrauch zu lesen.

Reagens-Vorbereitung

Alle Reagenzien sollten zur Raumtemperatur vor Gebrauch geholt werden.

Standard stellen das 120μl des Standards (2400pg/ml) mit 120μl des Standardverdünnungsmittels wieder her, um eine Lösung der Standardaktie zu erzeugen 1200pg/ml. Lassen Sie den Standard für 15 Minuten mit leichter Bewegung vor der Herstellung von Verdünnungen sitzen. Bereiten Sie doppelte Standardpunkte vor, indem Sie serienmäßig das 1:2 der Standardaktielösung (1200pg/ml) mit Standardverdünnungsmittel verdünnen, um Lösungen 600pg/ml, 300pg/ml, 150pg/ml und 75pg/ml zu produzieren. Standardverdünnungsmittel dient als der nullstandard (0 pg/ml). Jede restliche Lösung sollte an -20°C eingefroren werden und innerhalb eines Monats benutzt werden. Verdünnung vorgeschlagenen von den Standardlösungen sind, wie folgt:

Wäsche-Puffer verdünntes 20ml vom Wäsche-Puffer-Konzentrat 25x in entionisiert oder destilliertes Wasser, um 500 ml des Puffers der Wäsche-zu erbringen 1x. Wenn Kristalle sich im Konzentrat gebildet haben, Mischung leicht, bis die Kristalle vollständig sich aufgelöst haben.

Proben-Prinzip

Diese elisa Testausrüstung ist eine Enzym-verbundene Immunosorbent-Probe (ELISA). Die Platte ist mit Antikörper der Ratte GFAP vorgalvanisiert worden. GFAP stellen sich in der Probe wird hinzugefügt und bindet an die Antikörper dar, die auf den Brunnen beschichtet werden. Und dann biotinylated Antikörper der Ratten-GFAP wird addiert und bindet an GFAP in der Probe. Dann wird Streptavidin-HRP addiert und bindet an den Antikörper Biotinylated GFAP. Nach Ausbrütung wird befreites Streptavidin-HRP weg während eines waschenden Schrittes gewaschen. Substratlösung wird dann addiert und Farbe entwickelt sich im Verhältnis zu der Menge der Ratte GFAP. Die Reaktion wird durch Zusatz von säurehaltigem stoppen Lösung beendet und Absorption wird bei 450 Nanometer gemessen.

Exemplar-Sammlung

Serum lassen Serum für 10-20 Minuten bei Zimmertemperatur gerinnen. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für 20 Minuten.

Plasma sammeln Plasma unter Verwendung des EDTA oder des Heparins als Antigerinnungsmittel. Zentrifugieren Sie Proben für 15 Minuten bei 2000-3000 U/min bei 2 - 8°C innerhalb 30 Minuten der Sammlung.

Urin sammeln durch steriles Rohr. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten. Wenn Sie pleuroperitoneal Flüssigkeit und Zerebrospinalflüssigkeit sammeln, halten Sie bitte die oben erwähnten Verfahren ein.

Zellkultur Supernatant sammeln durch sterile Rohre, bei der Untersuchung Komponenten absondern Sie. Zentrifugieren Sie bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten. Sammeln Sie die supernatants sorgfältig. Wenn Sie die Komponenten innerhalb der Zelle überprüfen, verwenden Sie PBS (pH 7.2-7.4) um Zellsuspendierung zur Zellkonzentration von ungefähr 1 million/ml zu verdünnen. Schädigen Sie Zellen durch wiederholte Frieren-Tauenzyklen, um die inneren Komponenten heraus zu lassen. Zentrifugieren Sie bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten.

Gewebe-Spülengewebe in PBS (pH 7,4) zum des überschüssigen Bluts gänzlich zu entfernen und vor Homogenisation zu wiegen. Zerkleinern Sie Gewebe und homogenisieren Sie sie in PBS (pH7.4) mit einem Glashomogenisierer auf Eis. Tauen Sie an 2-8°C auf oder frieren Sie an -20°C. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten ein.

Merken Sie

• Beispielkonzentrationen sollten vorausgesagt werden, bevor man in der Probe verwendet wird. Wenn die Beispielkonzentration nicht innerhalb des Bereiches der Standardkurve ist-, müssen Benutzer mit uns in Verbindung treten, um die optimale Probe für ihre bestimmten Experimente zu bestimmen.
• Die innerhalb 5 Tage verwendet zu werden Proben, sollten an den Proben 2-8°C. gespeichert werden sollten aliquoted oder müssen an -20°C innerhalb 1-monatigen oder an -80°C innerhalb 6 Monate gespeichert werden. Avoid wiederholte Frieren-Tauenzyklen.
• Vor dem Beginnen der Probe Proben sollten zur Raumtemperatur geholt werden.
• Zentrifuge, zum der Probe vor Gebrauch zu sammeln.
• Die Proben, die NaN3 enthalten, können nicht geprüft werden, während es die Tätigkeit der Meerrettich-Peroxydase (HRP) hemmt.
• Sammeln Sie die supernatants sorgfältig. Als Sedimente während der Lagerung auftraten, sollte Zentrifugierung wiederholt werden.
• Hemolysis kann die Gültigkeit von Testergebnissen groß auswirken. Mach's gut, um Hemolysis herabzusetzen.

*Sample kann nicht mit dieser Ausrüstung verdünnt werden. Wegen des Materials pflegen wir, um die Ausrüstung vorzubereiten, drückt die Beispielmatrixstörung möglicherweise falsch die Besonderheit und die Genauigkeit der Probe nieder.

Probierverfahren

1. Bereiten Sie alle Reagenzien vor, Standardlösungen und Proben, wie angewiesen. Holen Sie alle Reagenzien zur Raumtemperatur vor Gebrauch. Die Probe wird bei Zimmertemperatur durchgeführt.

2. Bestimmen Sie die Anzahl von den Streifen, die für die Probe erfordert werden. Fügen Sie die Streifen in die Rahmen für Gebrauch ein. Die unbenutzten Streifen sollten an 2-8°C. gespeichert werden.

3. Fügen Sie Standard 50μl Standard gut hinzu. Anmerkung: Fügen Sie Antikörper nicht Standard gut hinzu, weil die Standardlösung biotinylated Antikörper enthält.

4. Fügen Sie Probe 40μl Beispielbrunnen hinzu und dann fügen Sie anti--GFAP Antikörper 10μl Beispielbrunnen hinzu, dann fügen Sie streptavidin-HRP 50μl Beispielbrunnen und Standardbrunnen hinzu (nicht Leerzeichenaufbereitungssteuerungsbrunnen). Mischen Sie gut. Bedecken Sie die Platte mit einem Eichmeister. Brüten Sie 60 Minuten an 37°C. aus.

5. Entfernen Sie den Eichmeister und waschen Sie die Platte 5mal mit Wäschepuffer. Tränken Sie Brunnen mit mindestens 0,35 ml-Wäschepuffer für 30 Sekunden bis 1 Minute für jedes Washington. Für automatisierte Reinigung saugen Sie alle Brunnen an und waschen Sie 5mal mit dem Wäschepuffer und überfüllen hervorquillt mit Wäschepuffer. Beflecken Sie die Platte auf Papierhandtücher oder anderes saugfähiges Material.

6. Fügen Sie Lösung A des Substrates 50μl jedem Brunnen hinzu und fügen Sie Lösung dann B des Substrates 50μl jedem gut hinzu. Brüten Sie die Platte aus, die mit einem neuen Eichmeister für 10 Minuten an 37°C in der Dunkelheit bedeckt wird.

7. Addieren Sie 50μl stoppen Lösung zu jedem gut, die blaue Farbe ändert in Gelb sofort.

8. Bestimmen Sie die optische Dichte (Od-Wert) von jedem Brunnen sofort unter Verwendung eines microplate Lesersatzes bis 450 Nanometer innerhalb 10 Menuetts, nachdem Sie die Endlösung addiert haben.

Referances

„Verlust des glial feinfaserigen säurehaltigen Proteins (GFAP) hindert Schwann-Zellproliferation und verzögert Nervenregeneration nach Schaden.“

Triolo D., Dina G., Lorenzetti I., Malaguti M., Morana P., Del Carro U., Comi G., A. verwirrend, Quattrini A., Previtali S.C.

J. Cell. Sci. 119:3981- 3993(2006)