Pth-Mensch Elisa-Ausrüstungs-Katze kein E1055hu 1.51pg/ml besonders angefertigt für Forschung

96 menschliche hohe Besonderheits-und Empfindlichkeits-PTH ELISA Ausrüstung Wells 48 Wells besonders angefertigt

Präzision

Intra-Proben-Präzision (Präzision innerhalb einer Probe) drei Proben bekannte Konzentration wurde auf einer Platte geprüft, um Intra-probenpräzision festzusetzen.

Inter-Proben-Präzision (Präzision zwischen Proben) drei Proben bekannte Konzentration wurde in den unterschiedlichen Proben geprüft, um Interprobenpräzision festzusetzen.

Lebenslauf (%) = SD/mean x 100

Intra-Probe: Lebenslauf<8>

Inter-Probe: Lebenslauf<10>

Proben-Prinzip

Diese Ausrüstung ist eine Enzym-verbundene Immunosorbent-Probe (ELISA). Die Platte ist mit menschlichem PTH-Antikörper vorgalvanisiert worden. PTH stellen sich in der Probe wird hinzugefügt und bindet an die Antikörper dar, die auf den Brunnen beschichtet werden. Und dann biotinylated menschlicher PTH-Antikörper wird addiert und bindet an PTH in der Probe. Dann wird Streptavidin-HRP addiert und bindet an den Antikörper Biotinylated PTH. Nach Ausbrütung wird befreites Streptavidin-HRP weg während eines waschenden Schrittes gewaschen. Substratlösung wird dann addiert und Farbe entwickelt sich im Verhältnis zu der Menge menschlichen PTH. Die Reaktion wird durch Zusatz von säurehaltigem stoppen Lösung beendet und Absorption wird bei 450 Nanometer gemessen.

Reagens bereitgestellt

Exemplar-Sammlung

Serum lassen Serum für 10-20 Minuten bei Zimmertemperatur gerinnen. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für 20 Minuten.

Plasma sammeln Plasma unter Verwendung des EDTA oder des Heparins als Antigerinnungsmittel. Zentrifugieren Sie Proben für 15 Minuten bei 2000-3000 U/min bei 2 - 8°C innerhalb 30 Minuten der Sammlung.

Urin sammeln durch steriles Rohr. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten. Wenn Sie pleuroperitoneal Flüssigkeit und Zerebrospinalflüssigkeit sammeln, halten Sie bitte die oben erwähnten Verfahren ein.

Zellkultur Supernatant sammeln durch sterile Rohre, bei der Untersuchung Komponenten absondern Sie. Zentrifugieren Sie bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten. Sammeln Sie die supernatants sorgfältig. Wenn Sie die Komponenten innerhalb der Zelle überprüfen, verwenden Sie PBS (pH 7.2-7.4) um Zellsuspendierung zur Zellkonzentration von ungefähr 1 million/ml zu verdünnen. Schädigen Sie Zellen durch wiederholte Frieren-Tauenzyklen, um die inneren Komponenten heraus zu lassen. Zentrifugieren Sie bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten.

Gewebe-Spülengewebe in PBS (pH 7,4) zum des überschüssigen Bluts gänzlich zu entfernen und vor Homogenisation zu wiegen. Zerkleinern Sie Gewebe und homogenisieren Sie sie in PBS (pH7.4) mit einem Glashomogenisierer auf Eis. Tauen Sie an 2-8°C auf oder frieren Sie an -20°C. Zentrifuge bei 2000-3000 U/min für ungefähr 20 Minuten ein.

Merken Sie

• Beispielkonzentrationen sollten vorausgesagt werden, bevor man in der Probe verwendet wird. Wenn die Beispielkonzentration nicht innerhalb des Bereiches der Standardkurve ist-, müssen Benutzer mit uns in Verbindung treten, um die optimale Probe für ihre bestimmten Experimente zu bestimmen.
• Die innerhalb 5 Tage verwendet zu werden Proben, sollten an den Proben 2-8°C. gespeichert werden sollten aliquoted oder müssen an -20°C innerhalb 1-monatigen oder an -80°C innerhalb 6 Monate gespeichert werden. Avoid wiederholte Frieren-Tauenzyklen.
• Vor dem Beginnen der Probe Proben sollten zur Raumtemperatur geholt werden.
• Zentrifuge, zum der Probe vor Gebrauch zu sammeln.
• Die Proben, die NaN3 enthalten, können nicht geprüft werden, während es die Tätigkeit der Meerrettich-Peroxydase (HRP) hemmt.
• Sammeln Sie die supernatants sorgfältig. Als Sedimente während der Lagerung auftraten, sollte Zentrifugierung wiederholt werden.
• Hemolysis kann die Gültigkeit von Testergebnissen groß auswirken. Mach's gut, um Hemolysis herabzusetzen.

*Sample kann nicht mit dieser Ausrüstung verdünnt werden. Wegen des Materials pflegen wir, um die Ausrüstung vorzubereiten, drückt die Beispielmatrixstörung möglicherweise falsch die Besonderheit und die Genauigkeit der Probe nieder.

Reagens-Vorbereitung

Alle Reagenzien sollten zur Raumtemperatur vor Gebrauch geholt werden.

Standard stellen das 120μl des Standards (1200pg/ml) mit 120μl des Standardverdünnungsmittels wieder her, um eine Lösung der Standardaktie zu erzeugen 600pg/ml. Lassen Sie den Standard für 15 Minuten mit leichter Bewegung vor der Herstellung von Verdünnungen sitzen. Bereiten Sie doppelte Standardpunkte vor, indem Sie serienmäßig das 1:2 der Standardaktielösung (600pg/ml) mit Standardverdünnungsmittel verdünnen, um Lösungen 300pg/ml, 150pg/ml, 75pg/ml und 37.5pg/ml zu produzieren. Standardverdünnungsmittel dient als der nullstandard (0 pg/ml). Jede restliche Lösung sollte an -20°C eingefroren werden und innerhalb eines Monats benutzt werden. Verdünnung vorgeschlagenen von den Standardlösungen sind, wie folgt:

Wäsche-Puffer verdünntes 20ml vom Wäsche-Puffer-Konzentrat 30x in entionisiert oder destilliertes Wasser, um 500 ml des Puffers der Wäsche-zu erbringen 1x. Wenn Kristalle sich im Konzentrat gebildet haben, Mischung leicht, bis die Kristalle vollständig sich aufgelöst haben.

Zusammenfassung

1. Bereiten Sie alle Reagenzien, Proben und Standards vor.

2. Fügen Sie Probe und ELISA-Reagens in jedes gut hinzu. Brüten Sie 1 Stunde lang an 37°C. aus.

3. Waschen Sie die Platte 5mal.

4. Fügen Sie Substratlösung A und B. Incubate für 10 Minuten an 37°C. hinzu.

5. Fügen Sie stoppen Lösung hinzu und Farbe entwickelt sich.

6. Lesen Sie den Od-Wert innerhalb 10 Minuten.

Berechnung des Ergebnisses

Konstruieren Sie eine Standardkurve, indem Sie das durchschnittliche Od für jedes grafisch darstellen, das auf der vertikalen (Y) Achse gegen die Konzentration auf der horizontalen (X) Achse Standard ist und zeichnen Sie eine beste Sitzkurve durch die Punkte auf dem Diagramm. Diese Berechnungen können mit computer-gestützter Kurveinstallations-Software gute Leistung gebracht werden und die beste Sitzlinie kann durch Regressionsanalyse bestimmt werden.